1、 寄生虫病检测技术组织内阿米巴检验方法操作作业指导书编 制： 审 核： 批 准： 版 本 号: ESZAQDGF001 编 制： 审 核: 批 准： 发 布： 二XX年X月1、目的依据寄生虫病检测检验技术-2005建立溶组织内阿米巴检验（直接涂片法）检验方法操作规程，保证测定结果的准确性。 2、适用范围 本法适用于组织内阿米巴的测定。 3、责任 使操作者熟悉本规程，并在具体样品检验中，严格遵照操作，确保检测结果准确。4、内容4.1形态本虫在生活史中分滋养体和包囊两个时期4.11滋养体4.111大滋养体：寄生于组织中，其体积较大，通常直径为2030um，甚至可达50um。在新鲜标本涂片中，虫体内2、外质分界明显，外质透明，约占虫体的1/3；内质颗粒状，常含有被吞噬的红细胞。红细胞呈淡黄绿色，由于被滋养体消化的关系，红细胞的形状及大小可不一致。体内吞噬有红细胞及红细胞的形状、大小不一，是大滋养体的重要特征。滋养体不活动时为圆形或卵圆形，活动时形状变化不规则，外质伸出形成宽而透明的伪足，内质随即涌进伪足里，使虫体向前推进。伪足运动活泼而迅速，常作定向移动。核不明显，有时可隐约见到一反光性圆块。在铁苏木素染色标本中，内质呈淡蓝黑色，外质的颜色更浅或不着色。核圆形，呈蓝黑色，核膜较薄，其内侧缘排列着一层大小均匀，排列整齐的染色质颗粒。核仁圆形，较小，常居中央。核仁与核膜之间可见到核网。被吞噬的红3、细胞呈蓝黑色。4.112小滋养体：体积较小，直径约为720um。在新鲜标本涂片中，内外质分界不明显，通常外质仅见于伪足部分。内质呈颗粒状，其中常含有较多的食物泡。泡内含有细菌或真菌而无红细胞是其特点。核不易见到。静止时为圆形或卵形；活动时，形状不规则，伸出的伪足短小，运动缓慢。在铁苏木素染色标本中，形态特征基本上与大滋养体相似，仅核仁较大。4.12包囊：呈圆球形或卵圆形，直径约为520um，内含有单核、双核或四个核。四核包囊为成熟包囊。在未成熟的包囊内，常含有两端钝圆呈棒状的拟染色体及糖原块。这些储存的营养物质，常随着包囊的成熟而逐渐被原虫利用消失。两端钝圆的棒状拟染色体是本虫包囊的重要特征。4、在新鲜标本涂片中，包囊为淡绿色或卵清色的圆球形小体，囊壁及拟染色体无色透明，反光性较强，核不易看见，有时可见反光性的小圆块。在碘液涂片中，包囊呈淡黄绿色或棕褐色，囊壁不着色，透明；核不着色，反光性较强，可见其数目为14个核（在不同平面上）；拟染色体也不着色，有时隐约可见。糖原块染成棕色或淡褐色，中央着色较深，边缘着色较浅而且模糊。这是碘液涂片后本虫包囊的一个重要特征。在铁苏木素染色标本中，包囊壁不着色而透明，细胞质呈淡蓝黑色或灰蓝色，核的构造与滋养体基本相似，但核膜内侧缘的染色质颗粒常呈半月形变厚。单核包囊的核较多核者大而清晰，拟染色体明显，染成蓝黑色，糖原块因在染色过程中被溶解而成为空泡。45、.2检验4.21粪便检查4.211直接涂片检查法：通常采用生理盐水涂片法检查生活的滋养体。在检查时应注意与巨噬细胞等加以区别，大滋养体的特征是运动活泼，定向移动和吞噬红细胞，而巨噬细胞也能吞噬红细胞，但运动并不活泼。在典型的阿米巴痢疾粪便中可见含有大滋养体，也含有很多聚集成堆的红细胞以及少量的白细胞、巨噬细胞和上皮细胞。在非典型粪便例如粥样或水样粪便里也可见有小滋养体或大滋养体。4.212碘液染色检查法：常用此法检查包囊。包囊多见于慢性阿米巴痢疾患者或带虫者的成型粪便中。4.213硫酸锌离心漂浮法：若标本中包囊数量很少而在涂片上不易检出时，可用33%硫酸锌溶液（比重1.180）漂浮法浓集包囊后6、，经碘液涂片法进行检查。4.214铁苏木素染色检查法：必要时可采用本法进一步鉴定虫种。4.22肝、肺脓肿的脓液检查：采用穿刺得来的脓液或咳出的痰液涂片镜检滋养体，但其检出率低。4.23培养法：必要时可用培养法进行辅助诊断。常用洛克氏鸡蛋清培养基和肝浸液培养基进行培养。附：人肠内阿米巴鉴别特征（一） 滋养体特征溶组织内结肠内微小内蜒布氏嗜碘哈氏内大小小养体1020um，大滋养体2040um2050um612um520um312um伪足为舌状或叶状，透明，伪足形成快为钝圆形，不太透明，伪足形成较慢为钝圆形，比较透明，伪足形成较慢为钝圆形，不太透明，伪足形成较慢伪足形成迟缓活动力运动活泼，有一定的方7、向运动迟缓，没有一定的方向运动迟缓，没有一定的方向运动迟缓，没有一定的方向运动迟缓内质与外质的区别明显不明显明显不明显明显核未染色不易看到或稍能看到能看到稍能看到稍能看到看不到铁苏木素染色一个核，核膜内侧缘的染色质颗粒细而排列整齐，核仁居中央一个核，核膜内侧缘的染色质颗粒粗而排列不整齐，核仁大，稍偏位一个核，核膜内侧缘无或仅有数粒染色质颗粒，核仁大，形状不规则一个核，核膜内侧缘无或仅有数粒染色质颗粒，核仁很大，圆形，位于中央，核仁周围有一层颗粒状物质一个核，核膜内侧缘的染色质颗粒细而排列不整齐，核仁小，居中或偏位食物泡内含物小滋养体内含细菌，大滋养体内含红细胞常含有很多食物泡，泡内含有细菌、酵8、母、淀粉颗粒细菌等细菌等细菌（二）包囊特征溶组织内结肠内微小内蜒布氏嗜碘哈氏内大小小型的3.512um，大型的1220um1022um长79um宽57um517um410um形状圆形圆形卵圆形或不规则圆形、卵圆形或不规则形圆形核数目14个，很少有8个的18个，很少有16个的14个1个偶尔有2个14个未染色一般看不到能看到稍能看到稍能看到不易看到碘染色清楚清楚清楚清楚铁苏木素染色与滋养体同，核膜内染色质粒常呈半月形变厚与滋养体相同与滋养体相同与滋养体相同与滋养体相同糖元块未染色不清楚不清楚不清楚隐约能看出不清楚碘染色棕色，边缘模糊大，边缘模糊或清楚，棕色。常在二个核的包囊中有边缘模糊或清楚，棕色。早期包囊偶尔有，晚期的无很大，棕色，边缘很清楚棕色，清晰铁苏木素染色被溶化成空泡被溶化成空泡未溶化成空泡被溶化成空泡，很显著拟染色体未染色能看出，棒状，两端纯圆形一般没有，即有也看不出没有没有碘染色一般不太清楚不清楚没有没有铁苏木素染色棒状，两端纯圆，蓝黑色碎片状或束状，两端尖，蓝黑色没有没有短棒状或碎粒状包囊壁未染色薄，清楚厚，清楚薄，清楚厚，清楚碘染色薄，透明厚，透明薄，透明厚，透明铁苏木素染色不清楚不清楚不清楚不清楚