1、吉林XX科技有限公司“科创中国”技术路演-生物医药研究背景材料和方法实验结果和讨论结论及计划功能益生菌研发耐酸酵母产淀粉酶抑制剂用于小鼠糖尿病防治n功能益生菌和人类健康n益生菌面临的问题n乳酸克鲁维酵母研究背景Kluyveromyces lactis1.功能益生菌和人类健康益生菌和糖尿病控制降低糖的吸收控制炎症 促进胰高糖素样肽-1(GLP-1,降血糖药物)表达提升短链脂肪酸（SCFAs）2.功能益生菌面临的问题不能耐胃酸与肠道粘附力弱定植能力不强pH2 以下很难生长3.乳酸克鲁维酵母美国FDA批准的食品安全级酵母抑制-葡萄糖苷酶和-淀粉酶活性酸味啤酒酿制酸奶制备在PH2.5仍然有60%以上的2、活性Current Microbiology,2020 77,28212830控制血糖糖尿病控制n乳酸克鲁维酵母分离和鉴定n低pH驯化和耐酸检测n n糖尿病小鼠模型构建和酵母喂养糖尿病小鼠模型构建和酵母喂养n-葡萄糖苷酶和-淀粉酶抑制剂活性检测材料和方法Kluyveromyces lactis1.乳酸克鲁维酵母分离和鉴定采样长白山涂板和分离二次分离单菌落培养传代培养镜检ITS测序分析生长曲线物种关系分析2.低pH驯化和耐酸检测不同pH和时间处理传代20次，每次24小时耐酸初次检测耐酸再次检测耐酸检测：液体培养，每0.1下调PH，若下降0.1不再生长3.糖尿病小鼠模型构建和酵母喂养糖尿病小鼠模型3、构建和酵母喂养建立2 型糖尿病小鼠模型通过高热量饮食小剂量多次腹腔注射链脲佐菌素实验分组对照组模型组模型组+正常菌模型组+耐酸菌检测指标血清葡萄糖（）甘油三酯（）胆固醇（）胰岛素（）、4.-葡萄糖苷酶和-淀粉酶抑制剂活性检测-葡萄糖苷酶抑制活性检测材料：酵母发酵液和小鼠粪便底物：4-硝基苯-D-吡喃葡萄糖苷(PNPG)标准品：野尻霉素检测方法：在酶标仪405nm处测定吸光度-淀粉酶抑制活性检测材料：酵母发酵液和小鼠粪便底物：水溶性淀粉标准品：阿卡波糖检测方法：DNS比色法n乳酸克鲁维酵母鉴定n乳酸克鲁维酵母耐酸度提升n n小鼠模型的糖尿病控制小鼠模型的糖尿病控制n-葡萄糖苷酶和-淀粉酶抑制剂活4、性提高结果和讨论Kluyveromyces lactis1.乳酸克鲁维酵母鉴定分离酵母菌株10株ITS 分析其中一株（编号RG001）与荷兰菌种库 K.lactis CBS 683 有最高95%的同源性分离菌种与已经报道的菌种有较远的关系分离菌种分离菌种2.乳酸克鲁维酵母耐酸度提升驯化前有菌只能在PH2.5 以上处理96小时存活K.lactis RG001驯化后能在PH2.0 处理96小时存活的有3株K.lactis RG001驯化后能在PH1.5 处理48小时存活的有1株驯化前驯化后2.小鼠模型的糖尿病控制小鼠模型的糖尿病控制第8周耐酸菌处理组血糖，甘油三酯和胆固醇均低于正常菌处理第8周耐酸5、菌处理组胰岛素高于正常菌处理3.-葡萄糖苷酶和-淀粉酶抑制剂活性提升第4和8周耐酸菌处理组-葡萄糖苷酶活性均高于正常菌处理第4和8周耐酸菌处理组-淀粉酶活性均高于正常菌处理创新点n驯化使乳酸克鲁维酵母耐酸度提升n n耐酸菌更利于小鼠模型的糖尿病控制耐酸菌更利于小鼠模型的糖尿病控制n耐酸菌提高了-葡萄糖苷酶和-淀粉酶抑制剂活性结论和计划Kluyveromyces lactis未来研究计划未来研究计划n n使抑制剂活性升高的代谢组学分析使抑制剂活性升高的代谢组学分析n n耐酸菌处理后的肠道菌群变化研究耐酸菌处理后的肠道菌群变化研究n n耐酸菌向健康产品的推广耐酸菌向健康产品的推广结论和计划Kluyveromyces lactis谢谢各位专家！谢谢各位专家！