1、动物性食品青霉素类兽药残留测定作业指导书编 制： 审 核： 批 准： 版 本 号: ESZAQDGF001 编 制： 审 核: 批 准： 发 布： 二XX年X月 一、简述本作业指导书适用于动物性食品中的青霉素类兽药残留测定。二、引用标准农业部958号公告-7-2007 猪鸡可食性组织中青霉素类药物残留检测方法农业部1163号公告-5-2009 动物性食品中氨苄西林残留检测农业部公告781-11-2006 牛奶中青霉素类药物残留量的测定NY/T 829-2004 牛奶中氨苄青霉素残留检测方法 三、操作步骤1. 空白基质溶液的制备：取空白样品5 .00(0.05)g，同3操作，平行3份。2. 对照2、品溶液的制备：精密称取青霉素类兽药对照品（青霉素V钾、青霉素G钠、氨苄西林、苯唑西林）适量用水制成标准储备液，再用水稀释成0.01mg/mL的标准工作溶液。3. 供试品溶液的制备：3.1 提取 精密称取样品(50.05)g置于50 ml聚丙烯离心管中，加入磷酸缓冲液15ml，振荡5min混匀，加正己烷5ml，振荡混匀，3000 r/min 离心15 min，弃去正己烷层，转移水层至鸡心瓶中；然后用磷酸缓冲液10ml和正己烷5ml重复提取2次，除去正己烷层，合并3次提取液供SPE净化。3.2 萃取净化 C18固相萃取柱依次用甲醇、水、氯化钠溶液和磷酸缓冲液各3 mL活化，取提取液过柱。用水1 m3、l和乙腈3 mL洗脱，收集洗脱液，于4550氮气吹干。3.3 衍生化反应 洗脱液于45氮气吹干，加标准稀释液1ml涡旋振荡溶解，转入10ml聚丙烯离心管中，加苯甲酸酐溶液50uL，旋涡混匀，50水浴反应5min，冰浴、快速冷却，加衍生化试剂500ul，旋涡混匀，65水浴反应10min，快速冰浴冷却，4 10000 r/min离心10min，取上清液供高效液相色谱分析。4. 供LC检测。色谱柱： Agilent Eclipse XDB-C8 5m 2504.6mm 流动相：A：乙腈 B：磷酸氢二钠+磷酸二氢钠+硫代硫酸钠+硫酸氢化四丁基铵溶液 A：B =35：65进样量：50ul检测温度：30 流速：1 mL/min检测器：紫外检测器检测波长：325nm5. 结果计算采用外标法根据色谱峰的峰面积，按下式计算 CsAVX= AsW式中：X样品中待测物残留量，单位为微克千克（ugkg）；A样品溶液中待测物残留衍生物的峰面积；V 样品溶液体积，单位为毫升（mL）As标准工作液中待测物衍生物的峰面积Cs标准工作液中待测物的浓度，单位为微克升（ugL）W样品的质量，单位为克（g）6.结果判定：三项均检测到，判定结果依照农业部235号公告附近动物性食品中兽药最高残留限量。四、注意事项1. 可以采用微波炉大火5 min解冻畜禽肉。2. 可使用保护柱，在柱压异常升高时更换保护柱芯。