1、天然泉水水源水大肠菌群推测性、确证性检验作业指导书编 制： 审 核： 批 准： 版 本 号: ESZAQDGF001 编 制： 审 核: 批 准： 发 布： 二XX年X月1.0 水源水1.1 范围本法适用于天然泉水水源水大肠菌群的检验。1.2 原理根据大肠菌群细菌具有的生物特性，如革兰氏阴性无芽胞杆菌，在37培养24h能发酵乳糖并产气的特点，将不同量的水样接种到含乳糖的培养基中，经培养后根据阳性反应结果可测出原水样中大肠菌群的MPN值。1.3 培养基和试剂1.3.1 乳糖胆盐发酵培养液。1.3.2 亮绿乳糖胆盐培养液（BGB）。1.3.3 灭菌生理盐水。1.4 仪器1.4.1 超净工作台。1.2、4.2 高压蒸汽灭菌锅。1.4.3 培养箱：361。1.4.4 冰箱：081.4.5 电子天平：感量0.1g。1.4.6 培养皿。1.4.7 小倒管。1.4.8 试管：150mm20mm,140mm15mm。1.4.9 吸管：10mL、5mL、1mL。1.4.10 接种环。1.4.11 酒精灯。1.5 检测步骤1.5.1 推测性检验1.5.1.1 吸取10mL水样接种到盛有10mL双料乳糖胆盐发酵培养液中，共接种5份。1.5.1.2 吸取1mL水样接种到盛有10mL单料乳糖胆盐发酵培养液中，共接种5份。1.5.1.3 另吸取1mL水样接种到9mL灭菌生理盐水中，混匀，用5mL灭菌吸管吸取5mL3、稀释液，分别加到5支盛有10mL单料乳糖胆盐发酵培养液中，每管1mL（即0.1mL水样）。轻摇试管，使液体充分混合，置361培养箱内培养24h。观察每支管是否产气，若有气体产生该管则为推测性检验阳性。如不产气则为大肠菌群阴性。1.5.2 确证性试验1.5.2.1 自推测性检验阳性管中取一接种环培养液，接种到亮绿乳糖胆盐培养液（BGB）管中，置361培养箱中培养48h。1.5.2.2 观察BGB管中的产气情况，如有气体产生，就可确定为“大肠菌群阳性”；如无气体产生则为“大肠菌群阴性”。记下BGB管里产气的阳性管数，查大肠菌群（MPN）检索表可得出水样中大肠菌群的MPN值。1.5.3 MPN值计算4、如水样含菌量少，也可按100mL、10mL、1mL接种，那么其实际MPN值应为表中的MPN值除以10；反之如含菌量较多，也可接种1mL、0.1mL、0.01mL，其实际MPN值应为表中的MPN值乘以10，余此类推。大肠菌群（MPN）检索表（总接种量55.5mL，其中5份10mL水样，5份1mL水样，5份0.1mL水样）接种量/mLMPN/100mL接种量/mLMPN/100mL1010.11010.1000010110012102600241038003510410004710512005911010102111601141128012611310013711412014911514015115、120602041218021612210022712312023912415接种量/mLMPN/100mL接种量/mLMPN/100mL1010.11010.10241112517025131308030613110031713212032913315033111341703413135190351514011040814113041914215042111431704313144190441514522045171501305091511505111152170521315319053151542205417155240551920051002201720293152720312320146、204143211720516322202107323242119324272121232531接种量/mLMPN/100mL接种量/mLMPN/100mL1010.11010.12131433017214173312121519332242209333282211233432222143353622317340212241934124225223422823012343322311434436232173454023320350252342235129235253523224015353372411735441242203554524323400132442540117245284022127、50174032525120404302522340536253264101725429411212553241226300841331接种量/mLMPN/100mL接种量/mLMPN/100mL1010.11010.130111414363021341542303164202230420421263052342232310114233831114424443121742550313204302731423431334323951411043345512130434525204943559521704403452294441405231204424752415044354525180444628、53079445695311104504153214045148533180452565342104536453525045472540130455815411705002354222050131543280接种量/mLMPN/100mL接种量/mLMPN/100mL1010.11010.15024354435050358545430504765502405059555135051033552540511465539205126355416005138455516002.0 成品水2.1 范围本法适用于天然泉水成品水大肠菌群的检验。2.2 原理根据大肠菌群细菌具有的生物特性，如革兰氏阴性无芽胞9、杆菌，在37培养24h能发酵乳糖并产气的特点，将不同量的水样接种到含乳糖的培养基中，经培养后根据阳性反应结果可测出原水样中大肠菌群的MPN值。2.3 培养基和试剂2.3.1 乳糖胆盐发酵培养液。2.3.2 亮绿乳糖胆盐培养液（BGB）。2.3.3 灭菌生理盐水。2.4 仪器2.4.1 超净工作台。2.4.2 高压蒸汽灭菌锅。2.4.3 培养箱：361。2.4.4 冰箱：082.4.5 电子天平：感量0.1g。2.4.6 培养皿。2.4.7 小倒管。2.4.8 试管：150mm20mm,140mm15mm。2.4.9 吸管：10mL。2.4.10 接种环。2.4.11 酒精灯。2.5 检测步骤210、.5.1 推测性检验2.5.1.1 吸取10mL水样接种到盛有10mL双料乳糖胆盐发酵培养液中，共接种5份。2.5.1.2 轻摇试管，使液体充分混合，置361培养箱内培养24h。观察每支管是否产气，若有气体产生该管则为推测性检验阳性。如不产气则为大肠菌群阴性。2.5.2 确证性试验2.5.2.1 自推测性检验阳性管中取一接种环培养液，接种到亮绿乳糖胆盐培养液（BGB）管中，置361培养箱中培养48h。2.5.2.2 观察BGB管中的产气情况，如有气体产生，就可确定为“大肠菌群阳性”；如无气体产生则为“大肠菌群阴性”。记下BGB管里产气的阳性管数，查用5管10mL水样时各种阳性和阴性结果组合的MPN值及其95%的可信限表。用5管10mL水样时各种阳性和阴性结果组合的MPN值及其95%的可信限阳性反应管数MPN/100mL 95%可信限下限上限0006.012.20.112.625.10.519.239.21.629.44163.352.95168.0无限