1、新生儿ABO溶血病及抗人球蛋白试验作业指导书编 制： 审 核： 批 准： 版 本 号: ESZAQDGF001 编 制： 审 核: 批 准： 发 布： 二XX年X月 新生儿ABO溶血病及抗人球蛋白试验作业指导书1、原理 (Test Principle): 1.1 实验方法:抗原抗体反应的免疫方法. 1.2 新生儿溶血病实验原理:ABO血型新生儿溶血病是由于母体的IgG型抗A(B)抗体通过胎盘进入胎儿体内，与胎儿相应抗原的红细胞结合，引起胎儿以溶血为主的病理损害。多见于O型产妇所生的A型或B型婴儿，由于母亲在怀孕ABO血型不合的胎儿以前就可有高效价的IgG型抗A(B)，所以ABO血型新生儿溶血病2、多发生在第一胎。 直接抗人球蛋白原理:直接抗球蛋白试验是检查体内致敏红细胞的一种方法，用于检查红细胞是否已被不完全抗体所致敏，如新生儿溶血病(胎儿红细胞被母亲血型抗体致敏)、溶血性输血反应(输入的不相和红细胞被受血者不完全抗体致敏)、自身免疫性溶血性贫血(患者红细胞被自身抗体致敏)以及药物诱导产生的自身抗体(由甲基多巴类药物，青霉素等所致) 1(3 间接抗人球蛋白原理:它是一种检测血清中不完全血型抗体的方法。即用已知抗原红细胞测定受检血清中相应的不完全抗体，或用已知抗体的抗血清测定受检红细胞上相应抗原。常用血型鉴定，抗体的检出和鉴定，输血前交叉配血试验以及其它的特殊研究。 2 、样本收集和贮存3、(Specimen Collection and Storage): 2.1 采集母亲未抗凝全血5ml,父亲未抗凝全血2 ml.患婴抗凝及未抗凝全血5ml.室温下可保存8小时，2-4?可保存2周。最好不用脐血,因可以产生直接抗人球蛋白的假阳性.采取出生3-7天的新生儿的全血分成1:4两份,一份抗凝,一份不抗凝,抗凝剂可以用EDTA-NA或肝素抗凝,抗凝剂与全血的比例为4:1,采集后立即送检,因时间过2长时,容易产生直接抗人球蛋白的假阳性. 2.2抗人球蛋白试验标本采集:采取4-5ML不抗凝全血立即送检. 2.3标本拒收条件:标本量不够,或为脐血标本,应退单,执行退单程序. 3 、试剂(Reag4、ents): 3.1 试剂来源:xx生物有限公司 3.2 批准文号:xx食药监械(准)字2005第2400053号 3.3 试剂规格:xx抗人球试剂:3ml/支, ABO反定型红细胞试剂10ml?支x2, 红STANDARD OPERATION PROCEDURE PAGE 4/8 STANDARD OPERATION PROCEDURE PAGE 4/8 K xx州金域医学检验中心 KM-SOP0302019 xx Kingmed Center for Clinical Labrotory Edition 1.0 细胞抗体筛检细胞3ml?支x3聚凝胺试剂100人份?盒 4、仪器(Instru5、ment):50-200UL定期校准的加样枪,37?恒温水浴箱.56?水浴箱 5、材料(Material):血型鉴定卡,7560玻璃试管 6、操作步骤(operate steps): 6、1 ABO血型及RH血型检测略,见ABO血型及RH血型检测作业指导书 6、2 游离试验: 6.2(1 取玻璃试管5支，分别编上A、B、O1、O2、O3，每管各加待测血清100ul，在A 管加A 型标准红细胞，在B 管加B 型标准红细胞，O 管加筛检红细胞各1滴，混匀。 6.2(2 然后加入4滴低离子介质，混匀后室温放置1分钟，加入2滴聚凝胺试剂，混匀后放15S后3500转/min离心10秒，若没有凝聚需查找原6、因，若有凝聚尽可能地倒干上清液，再加入2滴再悬液轻摇试管 6.2(3观察结果: 指示红细胞 意 义 AB型 ?型 ?型 ?型 型 + 游离的抗A + 游离的抗B 游离的抗A、抗B或抗A、B + + + 游离的ABO系统以外的抗体 + 游离的ABO系统以外的抗体 + 游离的ABO系统以外的抗体 无游离抗体 6(3释放试验: 6(3(1用竹支将细胞凝块搅碎，生理盐水洗涤三次，弃去上清，加8滴生理盐水，置56?水浴震荡10min，离心取上清液，即为放散液，用放散液代替6.1的待检血清进行检测 6(3(2检测结果判断同游离试验. 6(4 直接抗人球蛋白试验: 6(4(1 制备3%Rh(D)阳性红细胞盐7、水悬液(IgG抗D致敏)供阳性对照用:取3人O 型红细胞，混合，经盐水洗涤后取压积红细胞，加等量抗D血清，置37?水浴致敏STANDARD OPERATION PROCEDURE PAGE 5/8 STANDARD OPERATION PROCEDURE PAGE 5/8 K xx州金域医学检验中心 KM-SOP0302019 xx Kingmed Center for Clinical Labrotory Edition 1.0 60min取出，以生理盐水洗涤3次后，离心除去上清液，再用盐水配成3%红细胞盐.水悬液 6(4(2 制备正常人3%D阴性红细胞悬液，供阴性对照用:配制除不用抗D血清8、外，其余按上法配制。 6(4(3 取受检查红细胞，以生理盐水洗涤3次，末次洗涤后将上层盐水倒尽，再以滤纸将管口附着的盐水吸去，再配成3%红细胞盐水悬液。 6(4(4 取上述3%受检者红细胞盐水悬液1滴，滴入1试管(10mm60mm)内，加xx谱抗球蛋白血清2滴混匀。 6(4(5 阳性对照:不完全抗D血清致敏的3%D阳性红细胞悬液1滴加抗球蛋白血清1滴，混匀。 6(4(6 阴性对照:正常人3%D阳性红细胞悬液1滴加抗球蛋白血清1滴，混匀。 6(4(7 受检者以及阳性，阴性对照管同时以3000g/min，离心15s，轻轻混合，观察结果。 6(4(8 结果判定:如阳性对照管凝集，阴性对照管不凝集，受9、检红细胞凝集者为阳性，不凝集者为阴性。 7、质量控制(Quality Control): 7(1 标本采取后立即进行试验，延迟试验或中途停止可使抗体从细胞上放出。 7(2 抗球蛋白血清应按说明书使用最适稀释度，否则，可产生前带和后带反应，而误为阴性结果。 7(3 受检红细胞一定要用盐水洗涤3次，除去红细胞悬液中混杂的血清蛋白，以防止假阴性结果。 7(4 如果了解在体内致敏红细胞的免疫球蛋白类型，则可分别以抗IgG、抗IgM或抗单价抗球蛋白清进行试验。 C37(5 红细胞上吸附抗体太少，或Coombs阴性自身免疫性溶血性贫血直接抗球蛋白试验可呈假阴性反应。 7(6 全凝集或冷疑集血液标本及脐血标10、本含有Wharton胶，且洗涤不充分，血液标本中有很多网织红细胞，且抗球蛋白血清中含有抗运铁蛋白时，都可使红细胞产生凝集。 8、 间接抗人球蛋白试验: STANDARD OPERATION PROCEDURE PAGE 6/8 STANDARD OPERATION PROCEDURE PAGE 6/8 K xx州金域医学检验中心 KM-SOP0302019 xx Kingmed Center for Clinical Labrotory Edition 1.0 8(1 间接抗球蛋白试验操作步骤表1 间接抗球蛋白试验操作步骤: 反应物 受检管 阳性对照 阴性对照 血清(已知或受检) 2滴 5%红11、细胞悬液(受检或已知) 1滴 IgG抗D血清 2滴 AB型血清 2滴 5%D阳性红细胞悬液 1滴 1滴 混匀，置37?水浴60min用生理盐水洗涤3次。末次洗涤后，将上清液除尽，并用滤纸将附着于管口的盐水吸去。每管各留红细胞悬液1滴。 8.2 加最适稀释度抗球蛋白血清1滴，混匀，3000转/min，离心15s，观察结果。 8.3 阳性对照管凝集，阴性对照管不凝集，受检管出现凝集者为阳性，受检管不出现凝集者为阴性。 注意事项:1、红细胞洗涤应迅速，一开始洗涤就不应中途停止。洗涤用盐水要足量并用力冲入管底，使压积于管底的红细胞松离。切勿用手指堵住管口，颠倒混匀，以防污染来自皮肤的蛋白。 8.4离心12、速度和时间十分重要，应按规定进行。 9、生物安全: 应将所有的血标本视为传染性物质.操作时应带手套.穿工作服,如有血溅到工作服上应立即清洗.更换. 10、结果解释:略 11、临床意义: 直接抗球蛋白试验是检查体内致敏红细胞的一种方法，用于检查红细胞是否已被不完全抗体所致敏，如新生儿溶血病(胎儿红细胞被母亲血型抗体致敏)、溶血性输血反应(输入的不相和红细胞被受血者不完全抗体致敏)、自身免疫性溶血性贫血(患者红细胞被自身抗体致敏)以及药物诱导产生的自身抗体(由甲基多巴类药物，青霉素等) 11、参考文献(References): 11.1临床检验管理与技术规程.浙江大学出版 11.2xx州市血站的产前血清学操作规程. STANDARD OPERATION PROCEDURE PAGE 7/8 STANDARD OPERATION PROCEDURE PAGE 7/8 K xx州金域医学检验中心 KM-SOP0302019 xx Kingmed Center for Clinical Labrotory Edition 1.0 11.3 WS/T227-2002临床检验操作规程编写要求。 11.4xx生物有限公司的试剂说明书。 STANDARD OPERATION PROCEDURE PAGE 8/8 STANDARD OPERATION PROCEDURE PAGE 8/8