1、文件编号：111-10*食品有限公司x *S CO.,LTD.化验室管理手册 编 制 人： *审 核 人： x 批 准 人： 实施日期： x.01.01目录发布令2质量方针声明3组织机构5管理体系6文件控制8记录的控制.10技术要求总则11人员12设施与环境要求14检测方法17设备18微生物检验培养基试剂及其成份.2013.微生物检验操作标准及规程.2214化验室制度.36一、化验室安全管理制度.36二、化验室设备管理制度.39三 、化验室岗位责任制.40四、化验室员工上岗制度.43附件： 一、组织机构图.44二、化验室设备清单.45三、化验室化学药品一览表.46发 布 令为了保证实验室工作质2、量，确保检验结果的公正性、准确性和科学性，使实验室按国际通用标准运行，结合本化验室的工作实际，编制了管理手册体系文件。本手册是化验室日常管理和质量改进的保证，是进行质量审核，复审和评审的依据，是全体人员的工作指南。经审定，本手册符合实验室质量体系实际情况，现予批准发布，自 x年1月1日起实施。全体人员必须严格遵守并认真执行。总经理： x 2、质量方针声明质量方针：科学、公正、准确、高效所有检测工作必须做到方法科学严谨、行为公正、结果准确、优质高效。依据质量方针必须做到。2.1职业规范实验室全体人员在工作中严格遵守如下职业规范：2.1.1科学的工作态度以科学的态度对待工作，真实反映检测数据。质量3、管理和关键岗位人员要按照实验室质量体系文件进行质量控制；检测人员要按照规定的标准、方法进行检测，并如实记录检测结果。2.1.2公正的职业道德所有人员必须遵守保证实验室诚信度的管理程序，要站在第三方的公正立场上，客观、公正的出具检测报告，自觉维护实验室的公正地位和信誉。2.1.3专业的技术水平实验室管理人员要掌握与本实验室范围相适应的法律法规相关知识和信息，检测人员必须达到本化验室检测范围相适应的技术水平。实验室所有人员都接受相应的培训和教育，并达到相应要求。2.2检测质量本实验室出具的检测报告保证客观、公正、准确，做到检测结果与国家基准一致。2.3质量目标2.3.1质量体系目标保证全体人员熟知4、本室质量方针及体系文件并在工作中认真贯彻执行。2.3.2工作质量目标全年检测报告合格率大于99%；检测报告及时率高于99%；杜绝责任事故发生。3、组织机构 3.1目的阐明实验室的法律地位、公正立场、诚信度要求、活动准则；确立组织机构；规定从事影响检测质量的管理、执行或验证工作的人员的责任。3.2适用范围适用于所有影响检测质量的区域和从事影响检测质量的管理、执行或验证工作的人。3.3职责3.3.1经理负责组织机构的设置、职能的分配和资源的配置，任命关键岗位的人员。3.3.2化验员在各自的职责范围内具体执行相关职能。3.4要求3.4.1组织机构图（见附件） 3.4.2职责与权限化验室设有专职管理人5、员和关键岗位人员并赋有其履行职责所必需的权利和资源。3.4.3防止不恰当干扰对于任何削弱化验室技术能力、公正性以及对结果作出独立判断信心和工作品德的活动，以保证检测数据的公正性。4、管理体系4.1目的 对化验室质量管理体系的建立、实施和保持提出总体性要求及化验室质量管理体系文件的总要求。质量体系的所有要素都用文件方式给出，包括化验室管理手册、程序文件、作业指导书及记录。所有工作均应按质量体系要求进行运作。4.2适用范围适用于化验室质量管理体系及管理手册的控制。4.3职责4.3.1经理负责主持建立化验室质量管理体系，批准管理手册和程序文件，发布质量方针和目标。4.3.2负责人负责组织化验室质量管6、理体系文件的编制、实施和促进体系的持续改进。和检测过程的质量保证和技术活动的监督。4.4要求4.4.1质量管理体系文件的结构质量管理体系文件的构成分为三层，包括质量管理手册、相关体系的程序文件、作业指导和记录等。A、化验室管理手册是质量管理体系的主体文件，规定了质量方针、质量目标，组织职责及质量体系的总体描述，是指导内部各项质量活动，并对外提供质量保证和外部审核的依据。全体人员必须充分理解并遵照执行。B、程序文件是化验室管理手册的支持性文件，它规定各部门和人员进行或完成某项活动所规定的途径（或方法）的详细运行程序。C、作业指导书和记录，是具体作业的指导文件，回答如何做的问题，由具体操作人员使用7、，包括实验室检测方法、仪器操作规程等支持运行程序的文件以及技术记录和质量记录。4.4.2经理负责制定质量方针，包括质量目标和目录和承诺，并主持宣贯。4.4.3质量方针以文件形式颁布，各部门以适当方式确保岗位人员都能理解并贯彻执行。5、文 件 控 制 5.1目的对与质量管理体系有关的文件进行控制，确保各相关场所均能得到和使用文件的有效版本。5.2适用范围适用于化验室质量管理体系文件的编制、审批、发放、修改和管理等各个环节，包括外来文件的控制。5.3职责5.3.1经理负责化验室管理手册和程序文件批准。5.3.2质量负责人负责组织化验室管理手册、程序文件的编制及审核、批准质量记录格式和批准检验方法细8、则，以及技术标准，外来与法规的控制。5.4要求5.4.1文件编制a、化验室管理手册、程序文件的编制应符合相关法律法规的要求；b、其他文件的编制应与化验室管理手册相协调，不得与质量手册的要求相抵触；c、文件的文字表达应简明、准确、易懂，所有的符号、代号应符合有关规范，编制格式应统一。5.4.2文件编号质量管理体系文件以编号作为唯一性标识。5.4.3文件审批A、化验室管理手册和程序文件由质量负责人审核，经理批准；B、检验方法细则、仪器操作规程等作业指导书由质量负责人审核批准。C、质量负责人审核批准。5.4.4文件发放A、文件发放应建立发放记录，并注明受控状态；B、作废文件要及时从所有使用场所收回，9、因特殊需要所保留的任何已作废文件，都要进行醒目标记，防止误用。5.4.5文件修改A、遇下列情况之一时，文件应予以修改：文件不适应质量体系运行；文件与国家有关法规和标准不相适应；本化验室组织机构及职能发生变化时；其他需要修改的情况。B、文件修改的申请、编制、审核和批准与该文件原编制、审核、批准程序和部门相同。C、文件修改后，应将修改后的文件或文件修改通知书，按规定发放范围及时发放到位。5.4.6文件评审应定期对质量体系文件的有效性进行评审，必要时予以修改。6、记录的控制6.1目的记录是证明满足质量要求的程度或为质量管理体系运行的有效性提供客观证据，是开展各项工作的必要资料，是必要时为复现检测工作10、不可缺少的信息。因此，所有检测工作及质量体系运行过程，都必须客观地记录，并妥善保管。6.2适用范围适用于质量记录的标识、收集、编目、存档、借阅、维护、清理等环节的控制。6.3职责6.3.1质量管理部门负责其职责范围内的各类记录、报告书存根的归档保存。6.3.2相关责任部门负责收集由其形成的记录、档案，归档保存。6.4要求6.4.1质量体系和技术运作中形成的各类记录均应及时收集、标识、编目、存档。6.4.2质量记录包括：检测原始记录；检测报告存根等6.4.4所有记录应清晰明了，并以便于存取的方式保存在具有防止损坏、变质、丢失的环境中，保存期限视记录的性质确定。6.4.5所有记录应予以安全保护和保11、密6.4.6检测的观察结果、数据应在工作时予以记录，记录应包含足够的信息。 7、技术要求总则前面各章从管理要求的角度出发，对质量体系覆盖的检测服务领域做出了具体的规定和控制要求，以组织管理为出发和落脚点，采用系统的管理办法，达到追求检测服务质量持续改进的目的，其运作将是行之有效的。但是以上要求并不能证明实验室有出具技术上有效数据和结果的能力，这是因为决定实验室所开展检测的正确性和可靠性的因素还很多，所以必须从技术能力方面作进一步规定。化验室在人员培训、设备和环境的控制、检测方法确认、设备选择和校准、检测过程的控制等方面应考虑以下各因素的影响：a人员b设施和环境条件c检测方法d设备e检测样品的处12、置f检测结果的质量保证为确保检测工作的准确性和可靠性，必须根据以上各个要素的技术要求制定相应的程序。8、人 员8.1对人员配备、素质要求、适时培训进行控制，不断提高人员素质和技能以满足规定要求。8.2适用范围适用于质量管理体系涉及到的所有人员的配备、培训和考核。8.3职责8.3.1经理负责人力资源的配备8.3.2办公室负责编制化验室工作人员的培训计划，负责编制、组织实施业务人员资格证的考核计划，并组织实施。8.3.3质量管理部门负责对人员上岗资格的监督检查。8.4要求8.4.1使用签约人员应确保这些人员是胜任的且受到监督，并依据本化验室的质量体系要求工作。8.4.2人员培训根据工作需要和化验室13、具体情况，由办公室负责制定人员培训计划并组织实施。 8.5 人员简介姓 名性 别年 龄学 历所学专业工作年限备注本企业管受培训大生物受培训9、设施与环境条件9.1目的为了保证检测结果的准确性和有效性，本化验室根据不同的检测要求设置相应的检测环境并加以控制。必要时对可能影响检测工作的环境因素进行有效的监控。设施与环境条件应满足检测工作正常开展和安全的需要。9.2适用范围适用于监测设施及环境条件的配置及其控制。9.3职责9.3.1实验室提出设施和环境配置要求、设计和改造方案，并对所配备的设施和环境进行日常维护。9.3.2技术负责人对实验室提出的方案与要求进行审核。9.3.3经理批准实验室提出的方案14、和要求。9.3.4设备对实验室设施和环境的符合性和日常维护状况实施监督并负责各类设施的定期检修。9.4要求9.4.1实验室要将测试区域与办公场所分离，防止对检测工作质量产生不利影响。9.4.2实验室应布局合理，并采取有效措施，防止相邻工作区域间的不利影响。9.4.3实验室的设计或改造，应根据实验室的功能和用途，充分考虑能源、采光、采暖、通风等要求，并应考虑环境因素对检测工作可能造成的不利影响而采取有效预防措施。9.4.4实验室各种辅助设施和环境条件应能满足检测需要及仪器设备使用维护对环境的要求。对于有特殊环境要求的工作区域，其设施的配备应满足规定的要求，必要时应经过验证。9.4.5检测过程中使15、用的消耗材料和物质的贮存对环境有要求时，应有措施，保证，予以满足，避免材料和物资的损失或变质。9.4.6样品的收发、检测和贮存环境须符合标准规定或样品特定的要求，特殊样品应采取有效措施防止样品污染变质或对环境造成危害，详见样品管理程序的有关规定。9.4.7实验过程有强噪声产生，应采取减噪或隔声措施；有废气、废水、烟雾产生的实验室和试验装置，应配有合适的排放系统，以保证员工健康和检测工作质量不受影响。9.5监控与维持9.5.1实验室应按相关要求做好各种设施的日常维护，定期检查设施的完全性和环境条件的符合性，如有损坏应及时修复。9.6检测工作安全9.6.1对于有爆炸及类似危险的实验，应限定场所进行16、，并采取有效隔离和明显警示措施。9.6.2易燃易爆及有毒有害危险品的使用保管应严格按有关规定执行。9.6.3化验室应配备消防设施并放置醒目易取的地点。9.7实验室内务管理9.7.1实验室应保持清洁、整齐、安全的良好受控状态，不得在实验室内进行。与检测无关的活动，存放与检测无关的物品。9.7.2无关人员未经批准不得随意进入实验室，尤其是在有特殊要求的工作区域，应有警示标识并严格限制人员的进出，以免影响环境的稳定性和检测工作的安全。9.7.3外来人员进入实验室须经实验室负责人许可并由实验室人员陪同，同时要遵守有关保密等管理制度的要求。10、检 测 方 法10.1目的为确保检测数据准确可靠，有必要对17、开展检测活动中所采用的方法进行控制。10.2适用范围适用于检测活动的的各直接环节的方法选用、判定和确认的全过程。10.3质量管理部门负责对在用检测方法的有效性和检测方法的批准进行控制。10.4要求10.4.1方法的选择a、检测工作应优先采用已经由国际、区域、国家或地方颁布的标准、规程和规范。或者尽可能选择有关科学书籍和仪器设备制造商指定的方法（如技术说明书等）。并且，这些方法若能涵盖所需开展检测的足够信息，则不需再重新制定检测方法。质量管理部门应确保使用的标准、规程、技术规范和校准方法是最有效版本。首次采用或标准发生变化时，应对使用方法的能力进行确认，确保正确运用标准方法。标准检验方法：1、S18、N0168-92出口食品平板菌落计数 2、SN0169-92出口食品中大肠菌群、大肠杆菌群的检验方法。 3、SN0172-92出口食品金黄色葡萄球菌检验方法。 4、SN0170-92出口食品沙门氏菌检验方法。5、生活引用水卫生规范（2001）6、引用韩国方法检测大肠菌群、大肠杆菌、金黄色葡萄球菌。 7、农残检验按GB/T17331-1998标准检验。11、设 备11.1目的正确配备开展检测所需的全部设备，并对设备进行有效控制，确保检测工件的所有设备处于正常完好状态，保证检测结果的准确可靠。11.2适用范围适用于检测用仪器设备（包括标准物质）的配备、使用、维护、标识、档案管理等过程。11.3职责19、11.3.1设备科负责统一管理化验室的仪器设备及仪器设备档案资料的收集、归档。11.3.2实验室负责仪器设备的日常使用和维护保养、申购计划的提出，满足检测工作的需要。11.3.3经理负责组织对大型仪器设备申购计划进行论证，确定大型仪器设备购买计划，负责设备资源的配置、采购、调拨、报废的批准。11.4要求11.4.1仪器设备的配备a、对技术革新、仪器设备更新改造项目需要配备的仪器设备，由设备科会同实验室依据最新版本技术规范中规定要求，对拟购的仪器设备性能和测量不确定度进行论证，提出购置申请，报经理批准后订购。B、仪器设备到货后，设备科进行验收、安装、调试、标准，确认满足规定技术要求后，填写验收报20、告，并存档。11.5仪器设备的使用仪器设备在交付使用前，由设备科负责列入检定计划并组织实施，确认符合规定要求后，方可使用。 使用人员在操作仪器设备前后均应检查其状态。11.6仪器设备的管理a、对检测的仪器设备应用“三色标识”表明其受控及校准状态，标识上注明仪器设备编号、校准日期、有效期、校准单位；b、设备科负责建立统一管理的仪器设备的明细帐及仪器设备一览表等，并负责建立仪器设备档案。11.7仪器设备的故障鉴别及其处置a、仪器设备的故障鉴别可采用如下方法：检测人员使用前对仪器设备的功能和状态检查。按照设备管理程序进行期间核查，以鉴别其校准的可信性。设备科在周期检定管理过程中，不定期组织抽查是否超21、出检定周期，若需进行修正的仪器设备是否正确更新了修正值，如有调整装置是否有变动等。b、仪器设备的故障处理措施一旦发现仪器设备过载、误用、损坏等故障应立即停止使用，贴上停用证，并尽可能给予隔离以防误用；设备科负责对出现故障的仪器进行检修，若不能自行检修的报经理送外检修。12、微生物检验培养基试剂及其成份1、一般生菌数培养基：平板计数琼脂（Plate Count Agar）成份：胰蛋白胨、酵母粉、葡萄糖琼脂稀释液：生理盐水成份：氯化钠（Nacl）、蒸馏水2、大肠菌群培养基：结晶紫中性红胆琼脂（Violet Red Bile Agar）成份：蛋白胨、酵母粉、乳糖、氯化钠（Nacl）、胆盐、中性红、结22、晶紫琼脂。培养基：月桂基硫酸盐胰蛋白胨肉汤（Laury1 Sulfate Traptose Broth）成份：胰酪胨、氯化钠(Nacl)、乳糖、磷酸氢二钾（K2HPO4）、磷酸二氢钾（KH2PO4）、月桂基硫酸钠。培养基：煌绿乳糖胆盐肉汤（Brilliant Green Lactose Bile Broth）成份：蛋白胨、乳糖、牛胆盐、煌绿。稀释液：生理盐水成份：氯化钠（Nacl）、蒸馏水(H2O)。3、大肠杆菌培养基：EC肉汤（EC Broth）成份：胰酪胨、3号胆盐、乳糖、磷酸氢二钾、磷酸二氢钾、氯化钠。培养基：伊红美蓝琼脂(Eolin-Methylene Blue Agar)成份：硫酸镁23、7H2O(MgSO47H2O)、磷酸二氢铵（NH4HPO4）、磷酸二氢钾、枸椽酸钠（含2H2O）、氯化钠、溴百里蓝、琼脂。培养基：月桂花基硫酸盐胰蛋白胨肉汤（Laury1 Sulfate Traptose Broth）成份：胰酪胨、氯 化钠、乳糖、磷酸氢二钾、磷酸二氢钾、月桂基硫酸钠。稀释液：生理盐水成份：氯 化钠、蒸馏水。4、金黄色葡萄球菌培养基：Baird-Parker培养基成份：胰蛋白胨、牛肉膏、酵母膏、丙酮酸钠、甘氨酸、氯化锂（LiCl）、琼脂。培养基：普通肉汤培养基（Broth Medium）稀释液：生理盐水成份：氯化纳、蒸馏水培养基: 7.5%氯化钠胰蛋白胨大豆肉汤（Tryptic24、ase Soytone Broth）成分: 胰蛋白胨、植物蛋白胨、氯化钠、磷酸轻二钾、葡萄糖。13、微生物检验操作标准及规程 131、检验标准检验项目检验方法细菌总数同中华人民共和国进出品国商品检验行业标准SD168-92大肠菌群、大肠杆菌同中华人民共和国进出品国商品检验行业标准SN0169-92金黄色葡萄球菌同中华人民共和国进出品国商品检验行业标准SN0172-9213.2、食品微生物检验方法以包装完整的食品或以无菌操作作用消毒的镊子夹取食品约500g放入无菌塑料袋内，封口，直到检验前不得开口，以防污染。13.2.1、出口食品平板菌落计数13.2.1.1、主要内容与适当范围菌落总数主要作为判25、断食品污染程度的标志，也可观察细菌在食品中繁殖的动态，以便对被标样品进行卫生学评价时提供依据。主要规定了出口食品平板菌落计数方法，适用于各种出品食品及原料。13.2.2、设备和材料超净工作台、恒温培养箱：361、恒温水浴锅：451、均质器、吸管：1ml和10ml具有0.1刻度、平皿：直径为90、稀释瓶：广口瓶和三角瓶容量为250ml和500ml、天平：容量0.1g13.2.3、培养基和试剂平板计数琼脂、75%乙醇、稀释剂：生理盐水13.3操作程序13.3.1、以无菌操作取25g样品，放入装有225ml稀释剂的灭均质杯内，于8000r/min,制成1：10样品匀液，如样品均质时间超过2 min，26、应在均质杯外加冰水冷却，吸取样品时，吸管插入液面下不要超过2.5cm，吸管内液体要在2-4s内完全排入稀释剂中，不要在稀释剂中吹洗吸管。13.3.2、用10ml灭菌吸管准确吸取1：10样品匀液10ml，放入装有90 ml稀释剂的稀释瓶中，迅速振摇，制成1：100的样品液，从容器中吸取样品匀液和以后的稀释操作中，吸管尖不要碰着瓶口，吸入的液体应先高于所要求的刻度，然后提起吸管使其尖端离开液面并巾在容器内壁，将液体调节至所要求的刻度。13.3.3、分别用10ml灭菌吸管按4.2所述方法将样品匀液制成10倍递增稀释的样品液，如10-3、10-413.3.4、分别用灭菌器吸管取1ml样品液放入做了适宜27、的平皿内，每一个样品选择三个连续稀释度的样品液进行平板计数，每个稀释度的样品液用2个平皿。13.3.5、分别加12-15ml平板计数琼脂（已放451的水浴锅中恒温），到各平皿内，立即将平皿内的样品液和琼脂基充分混合。混合的方法是将平皿倾斜和旋转，要防止把混合物油到平皿壁和盖上，同时交平板计数琼脂倾入加有1ml稀释剂的另一个灭菌平皿内做空白对照，将样品液加入平皿后应立即倾注最后一个平皿所有的时间不得超过20min。13.3.6、待琼脂凝固后将平皿翻转，立即放进361的恒温培养箱内培养482h13.4、菌落计数和记录1)、培养后，立即计数每个平板上菌落数。25-250个菌落为合适范围，如果不能立即28、计数，应将平板存放于0-4，但不得超过24小时。2)、如只有一个稀释度的两个平板上的菌落在适应范围内，再将平均值乘以相应的稀释倍数，作为每克（毫升）样品中平板菌落数（下表样品1）。3)、如有两个稀释度在适应范围内，先计算两个稀释度两个平皿的平均值，再计算两个稀释度的平均值，然后计算每克样品中平板菌落数（下表样品2）。4)、当最低稀释度两个平板上菌落数都少于25个时，计数这一稀释度两个平板上的实际菌落数，计算两个平板上和平均菌落数，将平均菌落数乘以稀释倍数，得到估计的平板菌落数，给这个数注上星号（*），表明该数系从菌落数在25-250这一范围之外的平板估计所得（下表样品3）。5)、当所有平板上的29、菌落数超过250时，则应将最高稀释度的两个平板的平均菌落数乘以稀释倍数，得到估计的平板菌落数，给这个数注上星号（*），（意义同2）（下表样品4）。6)、 如果所有稀释度的平板都没有菌落，则以小于1乘以最低稀释倍数，报告平板菌落数，给这个数注上星号（*），（意义同4）（下表样品5）。7)、同一稀释度的两个平板中，一个有25-250个菌落，另一个菌落多于250个，两个平板都要计数，计算方法参照2)（下表样品6）。8)、两个连续稀释度中的每个平板稀释度都有一个平板的菌落数在25-250个范围内，而另一个菌落数高于250或低于25，四个平板都要计数，计算方法参照2)和3)（下表样品7）。9)、某稀释度30、的两个平板都有25-250个菌落，而另一稀释度的两个平板中只有一个平板的菌落数在25-250范围内，四个平板都要计数，计算方法参照2)和3)（下表样品8、9）。10)、蔓延生长菌落通常有三种不同类型的蔓延生长菌落。第一种类型是链状菌落，菌落之间没有明显界线。这些菌落是当琼脂和实验物混合时，一个细菌被分散所致；第二种类型是在琼脂和平皿底之间形成的水膜样菌落；第三种是在平皿边缘或琼脂表面开成的水膜样菌落，如果所选择的平板出现过量的蔓延菌落生长，以致于a被蔓延菌落盖住的地方，包括由于蔓延菌落造成的抑制生长区面积超过平板面积的50%，或b由于蔓延菌落造成的抑制生长区面积超过平板面积的25%，这样的平板31、报告为“蔓延菌落”，不予计数，计数其它平板上的菌落数，将这些数值的平均值报告为平板菌落数（下表样品10）。汉有必要计数除以上a 和b外的蔓延生长菌落时，将三种不同类型的蔓延菌落分别计数，对于第一种类型，如果仅有一条链，将它作为一个菌落计，如果有来源不同的几条链，将它作为一个菌落计，不要把链上、生长的各个菌落分开来数，第二种和第三种类型蔓延生长形成易于鉴别的菌落，即按一般菌落计数，把计数的蔓延的生长菌落数加在一起计算平板菌落数。13.5、计数和记录数字适宜稀释的两个平板的菌落数平均值或两个稀释度的平板菌数平均值乘以相应稀释倍数计算出每克（毫升）样品中的平板菌落数。记录时，只有在换算到每克（毫升）32、样品中平板菌落数时才能定下两位有效数字，第三位数字采用四舍五入的方法记录，也可将样品的平板菌落数记录为10的指数形式（见下表中例子）。13.6、结果报告报告每克（毫升）样品中平板菌落数或估计的平板菌落数。平板菌落数计样品号菌落数平均菌落数1：1001：10001：10000多不可计17516多不可计20817多不可计22425多不可计2453018201400多不可计多不可计多不可计多不可计000000多不可计24523多不可计27820多不可计22521多不可计22540多不可计21018多不可计24028多不可计26030多不可计23028多不可计24535多不可计230蔓延菌落注：带星号33、（*）者为估计数13.7、大肠菌群大肠杆菌的检验方法13.7.1、主要内容和使用范围大肠菌群主要来源于人畜粪便，食品中检出的大肠菌群说明有粪便污染。只要有粪便就被人们认为不卫生，被人所恶心，因此作为粪便污染指标来评价食品的卫生质量。大肠杆菌广泛污染水，土壤和食品，在食品检验中，一旦发现大肠杆菌即意味着直接或间接被粪便污染。主要规定了出口食品中大肠菌群，大肠杆菌的检验方法。适用于出口食品的检验。13.7.2设备和材料吸管1ml具0.1ml刻度，5ml和10ml，具1ml刻度、水浴锅：451、恒温培养箱：361、冰箱：0-5、均质器、乳钵和研棒、平皿：直径90、天平：感量0.1g显微镜、稀释瓶：234、50ml、500ml(三角瓶及广口瓶)13.7.3、培养基及试剂月桂基硫酸盐胰蛋白胨（LST）肉汤、煌绿乳糖胆盐（BGLB）肉汤、EC肉汤、伊红美蓝琼脂（EMB）、营养琼脂斜面、吲哚培养基、MR-VP培养基、Korser氏枸椽酸盐肉汤、结晶紫中性红胆盐琼脂（VRBA）、生理盐水、革兰氏染色液、Kovacs氏靛基质试剂、甲基红指示剂、Voges-Pros Kauer(V-P)试剂13.7.4、样品制备13.7.4.1、以无菌操作取有代表性的样品，如有包装则用75%乙醇在开口处擦拭后取样，若不能及时检验，应将冷冻样品置于-15冰箱保存，检验前冷冻样品可于2-5下18小时内解冻，或在45以下15mi35、n内解冻。13.7.4.2、以无菌操作取样25g，放入装有225ml的稀释剂的灭菌均质杯内，与8000r/min均质1-2min，制成1：10样品匀液（也可用灭菌乳钵研的方法代替）。13.7.4.3、稀释样品匀液根据对样品污染情况的估计，用稀释剂将匀液制成一系列10倍递增的样品稀释液，如10-2、10-3，从制备样品匀液至稀释完毕，全过程不得超过15min.13.8、大肠菌群的测定13.8.1、大肠菌群MPN1)、对每个样品，选择适宜的三个连续稀释度的样品稀释液，每个稀释度接种三管月桂基硫酸盐胰蛋白胨（LST）肉汤，每管接种1ml。2)、将接种管置于361观察试管的产气情况：检查倒管内是否有气36、泡产生，记录在48小时产气的LST肉汤管数，如所有LST肉汤管均未产气，则可报告为大肠菌群阴性：如有产气者，则进一步做证实试验。13.8.2、大肠菌群的证实试验1)、将所有产气管用直径为3的接种环移种到BGLB肉汤管中。2)、置BGLB肉汤管于361培养482小时。3)、记录所有BGLB肉汤产气管数。4)、按BGLB肉汤管数，查MPN表报告每克（毫升）样品中大肠菌群的MPN值。13.9、大肠杆菌的测定13.9.1、用直径为3的接种环将所有产气的LST肉汤管培养物移种于EC肉汤管中。13.9.2、将所有接种的EC肉汤管在30分钟内放入带盖451水浴锅中，培养482小时。13.9.3、记录EC肉汤37、管的产气情况取产气管培养物划线接种于伊红美蓝（EMB）平板，361培养242小时。13.9.4、检查平板上有无具黑色中心有光泽或无光泽的典型菌落。13.9.5、如有典型菌落，则从每个平板上至少挑取二个菌落；如无典型菌落，则从每个平板上至少挑取二个可疑菌落，用接种针接触菌落中心部位，移种到营养琼脂斜面上，361培养18-24小时。13.9.6、将斜面培养物移种到下列培养基中进行生化试验。1）、吲哚培养基：在361培养242小时后，加Kovacs氏试剂0.2-0.3ml,上层出现红色为靛基质阳性反应。2）、MR-VP培养基：在361培养482小时，以无菌操作移取培养物1ml至13100试管中，加538、%a-萘酚乙醇溶液0.6ml和少许肌酸结晶，振摇试管后静置2小时，如出现伊红色。为VP试验阳性。将MR-VP培养物的剩余部分再培养48小时滴加5滴甲基红溶液，如培养物呈红色，为甲基红试验阳性，若变黄色则为阴性反应。3）、Koser氏枸椽盐肉汤：于361培养96小时记录有无生长。4）、LST肉汤：于361培养482小时，观察试管中是否产气。5）、革兰氏染色：取18小时营养琼脂斜面培养物作革兰氏染色，大肠杆菌为革兰氏阴性。6）、大肠杆菌与非大肠杆菌生化鉴别如下：靛基质MRVP枸椽酸盐鉴别（型别）+-典型大肠杆菌-+-非典型大肠杆菌+-+典型中间型-+-+非典型中间型-+典型产气肠杆菌+-+非典型产39、气肠杆菌如出现上表以外的生化反应类型，表明培养物可能不纯应重新划线分离，必要时作重复试验。13.9.7、结果报告：大肠杆菌为革兰氏阴性无芽孢杆菌，发酵乳糖产酸产气，IMCIC试验为+-或-+-，再根据肉汤阳性管数查MPN表，报告每克（毫升）样品中大肠菌MPN值。13.10、大肠菌群固体培养基测定法13.10.1、选择适宜的三个连续稀释度的样品液，每个稀释度接种两个灭菌平皿，每皿1ml，另取1ml稀释剂加入一个灭菌平皿中，作空白对照。13.10.2、将冷至450.5的结晶紫中性红胆盐琼脂（VRBA）10-15ml倾注入每个平皿中，小心放置平皿，将培养基与样液充分混匀。13.10.3、待琼脂凝固后40、，翻转平板，置361培养18-24小时。13.10.4、选用于30-150个菌落的平板，计数平板上出现的典型大肠菌群菌落，典型菌落为紫红色，菌落周围有红色胆盐沉淀环，菌落直径为0.5或更大。13.10.5、证实1）、从结晶紫中性红胆盐琼脂平板上挑取10个不同类型的典型和可疑菌落，移种于BGLB肉汤管中，361培养24小时，观察产气情况。2）、将出现产气的肉汤管判为大肠菌群阳性，对形成菌膜的阳性管，应进行革兰氏染色，以便排除革兰氏阳性杆菌。3）、结果报告经最后证实为阳性（产气，革兰氏阳性杆菌）的试管百分比乘以7.4中计数的平板菌落数，再乘以稀释倍数，即位每克毫升）样品中大肠杆菌数。例：104样品41、稀释液1ml，在结晶紫中性红胆盐琼脂平板上有100个典型和可疑菌落，挑取其中10个接种BGLB肉汤管，证实有6个阳性管，则该样品中的大肠菌群数为：1006/10104/g（毫升）=6.0105/g(ml)。13.11、金黄色葡萄球菌检验方法13.11.1、主要内容和适用范围金黄色葡萄球菌主要是在人和动物皮肤粘膜损伤后而感染，可引起化脓性炎症，食品被该菌污染，人食用引起毒素型食物中毒，因而认为食品污染金葡是食品卫生上的一种潜在危险。主要规定了出口食品中金黄色葡萄球菌的检验方法.。13.11.2、设备和材料恒温水浴锅：451、均质器、吸管：1ml，具0.1ml刻度、平皿：直径为90、稀释瓶：广口瓶42、和三角烧瓶，容量为200ml和500ml、天平：感量0.1g、L形玻璃棒、恒温培养箱13.11.3、培养基和试剂7.5%氯化钠肉汤、Baird-Parker培养基、营养肉汤、凝固酶试验兔血浆13.11.4、样品制备与MPN测定法13.11.4.1、以无菌操作称取25g样品，放入装有225ml灭菌生理盐水的灭菌均质杯内，于8000r/min均质1-2min,制成1：10样品匀液。13.11.4.2、选三个连续稀释度，从每个稀释度分别取1ml稀释样品液，接种三管7.5%氯化钠肉汤管中，置361中18小时。13.11.4.3、用3mm接种环,从有细菌生长的各管中移取1环,话线接种于表面干燥的BP琼脂43、平板上，置361中48小时。13.11.4.4、从有细菌生长的每个平板上挑取一个可疑金黄色葡萄球菌菌落（金黄色葡萄球菌的单个菌落在BP琼脂平板上呈圆形，表面光滑、凸起、湿润、直径2-3mm、灰黑色至黑色，有光泽，常有浅色非白色的边缘，周围绕以不透时圈沉淀，其外常有一清晰带。当用接触针触及菌落时具有黄油样粘稠感。有时可见到不分解的菌株，除没有不透明圈和清晰带外，其它外观基本相同），移种到肉汤管中，置361培养24h。13.11.4.5、 取肉汤培养物0.3ml同0.5ml凝固酶实验兔血浆于8mm100 mm试管内充分混合,至361培养,定时观察是否有凝块形成,至少观察6h以内容物完全凝固,使试管44、倒置或倾斜时不流动时为阳性。实验中需同时做已知阳性和阴性对照。对可疑结果，应进行革兰氏染色，镜检试验，加以证实。13.11.4.6、报告结果根据凝固酶实验结果查最近似值(MPN),报告金黄色葡萄球菌的MPN/g(ml)。13.11.5、平板表面计数法13.11.5.1、选三个连续稀释度，从每个稀释度分别取1ml稀释样品液，接种至三个表面干燥的BP琼脂平板上（如：0.4ml-0.3ml-0.3ml）。13.11.5.2、以L形玻璃棒将接种物涂于琼脂表面，避免涂到平板边缘，将平板正置直至接种物被培养基吸收，将平板翻转，361培养48小时。13.11.5.3、挑选有20-200个菌落的平板进行计数，45、如果有数种菌落皆类似金黄色葡萄球菌，则分别计算和记录每一类型的菌落数，当最低稀释度的平板的菌落数小于20时，仍可选用。如平板的菌落数大于200，其中有些菌落具有典型金黄色葡萄球的外观，同时在其高倍稀释度未出现典型菌落都有，亦可用这些平板进行金黄色葡萄球菌计数，但不能把非典型细菌计算在内。13.11.5.4、 报告结果将呈凝固酶阳性的菌落所代表的三个平板上的菌落数相加并乘以样品稀释倍数,即以此数报告为所检查食品中的金黄色葡萄球菌/g(ml)。13.12、水质微生物检测方法13.12.1、抽样方法:将水管用75%酒精喷洒,打开水笼头，放置5分钟，用消毒的塑料袋接取约500g水样。13.12.2、接46、种用1ml灭菌吸管各取1ml入平皿内,每个稀释度两个平皿.13.12.3、培养基及培养条件13.12.3.1、平板计数琼脂:将12115杀菌的培养加热沸腾,放入水浴锅冷却至50,分注到培养皿(15ml/皿)凝固,干燥后翻转于36148h培养.13.12.3.2、结晶紫中性红琼脂(VRBA): 按瓶中配制说明配制后加热煮沸2min,放入水浴锅冷却至50,分注到培养皿(15ml/皿)凝固.燥后翻转于361 242h培养.13.12.4、判定细菌总数: 平皿内出现所有细菌.大肠菌群:无典型菌落判为阴性.13.12.5、涂抹检测方法13.12.5.1、器具准备、将棉球放入250ml广口瓶加入适量蒸馏水47、.、用高压消毒锅121杀菌15.、待凉后,于4冰箱内保存一星期.13.12.5.2稀释液、按比例配制生理盐水.、分装试管,每管10ml.、用高压消毒器121杀菌15.、待凉后，放入4冰箱保存。13.12.5.3、抽测方法:、用5cm2取菌环固定于待测点.、用镊子夹取灭菌棉球于环内,正反运转五次,放入灭菌试管内摇匀,作成1:1稀释液.13.12.6、接种用1ml灭菌吸管器吸取1ml稀释液于平皿内,每个稀释度两个平皿.13.12.6.1、涂抹用培养及基及其条件、平板计数琼脂:将12115杀菌的培养基加热煮沸冷却到50,分别注入培养皿(15ml/皿)摇匀.待干凝固后,翻转于361培养48h.、结果紫48、中性红琼脂(VRBA):按瓶上配制说明配制后加热煮沸2min,冷至50,分注到培养皿(15ml/皿)摇匀.待干.凝固后翻转于36培养242h.EC肉汤:按瓶上说明配制后灭菌,于4冰箱冷藏,接种后于44.50.2培养48h.13.12.7、判定、细菌总数:平皿内所有菌落.、大肠菌群:平皿无典型菌落判为阴性,几个典型为几个/cm2.、大肠杆菌:EC不产气为阴性,产气为阳性.13.12.8、空气菌落检测方法:、将12115杀菌的平板计数琼脂以无菌操作倒入平皿约15ml.、待干,凝固.、将平皿放入测试点,打开顶盖4/5曝放5分钟,盖上顶盖.、将平皿放入361培养箱内,准清洁区100个/皿.13.12.49、9.空白试验:、取试验用“同批”灭菌培养皿2个、倒入同批检验用的培养基10-15ml、待凝固,干燥后,同检验培养皿放入361培养箱内培养48h、计算菌落(用于参考同批检验培养基是否灭菌完全)空白试验不得检出,若有则表示同批检验培养灭菌不彻底或操作有误.14、化验室制度一、化验室安全管理制度1.目的 确保化验室的药品、仪器、操作的安全。2适用范围 适用于化验室及药品仓库。3. 制度内容3.1化验室工作人员必须有严谨的工作态度、熟练的业务技能，具备必要的化工安全知识，熟悉了解所用药品、仪器的性能及水电供给情况；3.2定期检查各种安全设施（通风橱、电器、消防器材）是否安全有效如有异常，应及时通知有关50、人员检修，并且熟悉一般防火救火知识和药品中毒急救常识；3.3实验室内的各种仪器、器具应放置于规定场所，不得任意堆放,避免错拿错放，造成安全事故；3.4所有化学试剂都应贴有试剂名称、浓度、配制标定日期、配制标定人员姓名的标签，不得使用无标签或标签模糊的试剂；3.5使用各种仪器设备时，必须严格按安全使用规则和操作规程进行。认真填写有关操作记录。记录要求真实、清楚、齐全、规格化，并且不得随意更改；3.6使用易燃、易爆和剧毒试剂时，必须遵照有关安全规定操作。易燃、易爆和危险品要随用随领，实验室内存量不得超过5公升。剧毒试剂应有专人保管，经批准后方可使用，且应两人共同称量，登记用量；3.7易燃、易爆试剂51、应存放在阴凉通风处，室内存放的易燃、易爆和危险品应严格控制并加强管理；3.8使用电器及明火时，应按有关规定进行操作，不得用湿手触摸电器及开关，所有电器必须有可靠接地；3.9在电炉、电热板、电热套上加热、蒸馏及烧蒸馏水时，不得随意离开，避免发生意外事故；3.10使用水浴锅、蒸馏水器时，必须确定里面水位达到要求后，方可合闸。使用时，应经常检查水位；3.11发生意外事故时，应迅速切断电源，立即采取有效措施紧急处理并上报有关领导；3.12含有 剧毒物质或强酸强碱的废液，不能直接排入下水道，必要时可先经过转化处理再行排放；3.13用有机溶剂或挥发性试剂时，应在通风橱内进行，并配戴适当的防护用品，严禁用明52、火直接加热有机溶剂；3.14稀释浓硫酸时，应按规定戴上耐酸手套、穿上防护服，在连续搅拌的情况下，缓慢地将硫酸倒入水中，切勿将水倒入浓硫酸中；3.15打开浓盐酸之前，须将盐酸瓶放在水龙头下冲洗冷却10分钟，然后在通风橱内打开盖子；3.16做好防盗、防火工作，工作人员离开化验室时，应检查水、电、气、门窗是否关严； 3.17严禁以任何实验器具当饮水具、餐具使用，防止中毒事故发生；3.18严禁在化验室内吸烟、煮食等违章行为；3.19腐蚀性、挥发性物品，不能在烘箱、微波炉内加热，尤其是有机溶剂 ，严禁在微波炉内加热；3.20在压碎或研磨苛性碱或其他危险物质时，要谨防溅散，以免烧伤眼睛、面部或身体其他部分53、；3.21回收试剂时，溶液不得超过总体积的2/3，剩余试剂必须倒入专门的回收桶内；3.22若使用不小心，把碱类物质如氢氧化钠、氨水等倒在身上，应立即用大量清水冲洗伤处，然后再用0.2的乙酸溶液冲洗；若把酸性物质如硫酸、盐酸、硝酸、乙酸等倒在身上，先用大量清水冲洗，然后再用饱和碳酸钠溶液冲洗。二、化验室设备管理制度1、目的：保证化验室设备的正常运行。2、适用范围：化验室所有的设备的管理。3、制度内容：31室内各种仪器设备，根据工作需要和使用方便要有计划的布置好，保持室内清洁整齐、安静，非工作人员严禁入内，严禁吸烟和吃东西。32精密仪器要严格管理，要定期对各种仪器设备进行计量校准。33仪器出现问题54、须由专业人员进行维修，并做好维修记录。34所有玻璃仪器摆放整齐，如三角杯、量筒等不能干烧，用完后用清水洗净，晾干后放入玻璃仪器橱，用时放入干燥箱中灭菌后方可使用。35做细菌培养所使用的玻璃仪器，用完后必须经高温杀菌后方可洗刷，然后用蒸馏水洗第二遍，晾干后放入玻璃仪器橱，用时放入干燥箱中灭菌。36每天下班前都要将培养箱、冰箱的温度检查一遍，看是否符合细菌培养要求，对于不使用的，如干燥箱、高压锅等要检查其电源是否短电，以免发生危险。37电动仪器用完立即关闭，如有漏电情况立即通知维修人员进行维修。三、化验室岗位责任制1目的：明确化验室的工作责任，利于工作的正常运行。2适用范围： 实验室的工作分配。355、制度内容：31化验室主任311 负责安排化验室的日常工作；312 负责与商检、技术监督局、卫生防疫站等政府部门的工作联系；313 根据公司的产品开发计划，安排作必要的试验及有关的调查工作；314 负责对质量事故进行处理，并将处理结果报总经理；315 负责审核化验室的检验结果；316 负责质量检查报表的审核工作；317 负责检查化验室的检验员的工作；318 负责对仪器设备的备品备件的采购工作；319 负责对出口卫生许可证的定期审核工作；3110 负责与ISO9001,HACCP等质量体系相关的工作；3111 负责对化验室员工的培训考核工作；3112 负责所用标准溶液的配制与标定；3113 参与不56、合格品的评审；3114 参与管理评审；32. 化验员321 熟练掌握所涉及的实验基本原理和操作；322 负责对文件的日常管理包括文件和记录的定期存档、销毁工作；323 负责每月做好日常仪器药品的采购计划；324 应熟练掌握所涉及的实验的基本原理及操作；325 负责对原料、辅料的进货检验和验收工作；326 负责研究性试验工作；327 负责对药品仪器的日常管理；328 负责对样品的日常管理；329 负责每天对工序巡检，每个月对分供方的质量情况汇总；3210 负责对化验室仪器设备的管理、鉴定工作，并做好日常维护保养,使其处于合格状态；3211 负责每月2号之前完成报表的打印工作，交质检经理。321257、 遵守公司和化验室的规章制度，服从上级领导的工作安排；3213 应熟练掌握一般的实验操作，尤其是天平称量、酸碱滴定；3214 应搞懂弄通所测分析项目的测定方法及计算；3215 能配制常见的试剂；3216 负责成品出厂的检验工作；3217 负责锅炉水的检验工作；3218 负责对库存的原料的分析工作；3219 负责填写原始记录和报表，保证其完整性、有效性、准确性。3220 负责化验室的卫生清洁工作；3221 服从领导安排的其他工作。四、化验室员工上岗制度1目的保证化验室工作的正常运行。2适用范围 适用于化验室新员工。3内容要求31了解并遵守公司的各项规章制度, 解并遵守化验室的各项规章制度；32由化验室主管安排进行相应的上岗培训,培训内容包括：基础知识、检验基本要求、基本化验操作、检测器具的使用等；33新员上岗要求：331化验员必须熟练操作并掌握色价、水份、盐度、砂份、铁份、粗脂肪、辣度等几项基本操作,并经考核合格后方可上岗；332化验员必须熟练操作各种检测器具,熟悉本岗位工作内容及要求, 经考核合格后方可上岗。附件：一、组织机构图 经理质检部化验室农残速测、微生物工作室协议实验室 二、化验室设备清单名称型号生产厂家计量周期1年/ 购买人:三、实验室化学药品一览表化学药品名 称入库时间入库数量库房编号购买人签 名购买地点管理人签 名